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crisp_bio CRISPR-SpyCas9遺伝子ノックアウト・メタ予測法開発コメント

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世界初、体内に存在する老化の原因となる細胞の解析に成功

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電子産業が「医療・生命科学」に期待するもの：福田昭のデバイス通信（195） 2019年度版実装技術ロードマップ（6）（3/3 ページ）

次世代型逆遺伝学による睡眠遺伝子Nr3aの発見

ゲノム編集による細胞株作製

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1. Cre組換え酵素とloxP部位2. Cre/loxPシステムの遺伝子組み換え原理3. Cre/loxPシステムを利用して特定遺伝子のノックアウトマウスを作製する4. Cre/loxPシステムの利点と問題

効率的な方法で、短期間に免疫のないブタを作ることに成功

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-実験動物開発室-14. 1世代でES細胞由来の精子のみを持つキメラマウスを作出

siRNAを用いた簡便な遺伝子ノックアウト技術

東京女子医科大学実験動物研究所メニューメニュー遺伝子改変マウス作製方法の詳細ゲノム編集技術を用いた遺伝子改変マウスの作製メニュー

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脳の働きを分子から考える　その2 〜遺伝子改変動物開発技術の発展（2018年5月7日公開）（左上）当研究室で独自に樹立したC57BL/6N系マウスES細胞（RENKA細胞）。（左下）マイクロインジェクション法によるキメラマウス作製。マウス8細胞胚中に数個のES細胞を注入することでキメラマウスが作製できる。（右）作製されたキメラマウス。黒色に近いほどES細胞に由来する細胞の比率が高い。右端のマウスはほぼ全身の細胞がES細胞由来だと考えられる。（左）当研究室で独自に樹立したES細胞より作製されたキメララット。ES細胞に導入されたVenus遺伝子の蛍光が体の一部で発現している。（右）キメララット由来の産仔。3匹中の1匹でキメララットより生殖系列伝達したVenus遺伝子が全身で発現している。（文献）Aida, T., Chiyo, K., Usami, T., Ishikubo, H., Imahashi, R., Wada, Y., . . . Tanaka, K. (2015). Cloning-free CRISPR/Cas system facilitates functional cassette knock-in in mice. Genome Biol, 16, 87. doi:10.1186/s13059-015-0653-xBuehr, M., Meek, S., Blair, K., Yang, J., Ure, J., Silva, J., . . . Smith, A. (2008). Capture of authentic embryonic stem cells from rat blastocysts. Cell, 135(7), 1287-1298. doi:10.1016/j.cell.2008.12.007Cong, L., Ran, F. A., Cox, D., Lin, S., Barretto, R., Habib, N., . . . Zhang, F. (2013). Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science, 339(6121), 819-823. doi:10.1126/science.1231143Gurumurthy, C. B., Takahashi, G., Wada, K., Miura, H., Sato, M., & Ohtsuka, M. (2016). GONAD: A Novel CRISPR/Cas9 Genome Editing Method that Does Not Require Ex Vivo Handling of Embryos. Curr Protoc Hum Genet, 88, Unit 15.18. doi:10.1002/0471142905.hg1508s88Kaneko, T., & Mashimo, T. (2015). Simple Genome Editing of Rodent Intact Embryos by Electroporation. PLoS One, 10(11), e0142755. doi:10.1371/journal.pone.0142755Li, P., Tong, C., Mehrian-Shai, R., Jia, L., Wu, N., Yan, Y., . . . Ying, Q. L. (2008). Germline competent embryonic stem cells derived from rat blastocysts. Cell, 135(7), 1299-1310. doi:10.1016/j.cell.2008.12.006Mali, P., Yang, L., Esvelt, K. M., Aach, J., Guell, M., DiCarlo, J. E., . . . Church, G. M. (2013). RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science, 339(6121), 823-826. doi:10.1126/science.1232033Mashiko, D., Fujihara, Y., Satouh, Y., Miyata, H., Isotani, A., & Ikawa, M. (2013). Generation of mutant mice by pronuclear injection of circular plasmid expressing Cas9 and single guided RNA. Sci Rep, 3, 3355. doi:10.1038/srep03355Mishina, M., & Sakimura, K. (2007). Conditional gene targeting on the pure C57BL/6 genetic background. Neurosci Res, 58(2), 105-112. doi:10.1016/j.neures.2007.01.004Wang, H., Yang, H., Shivalila, C. S., Dawlaty, M. M., Cheng, A. W., Zhang, F., & Jaenisch, R. (2013). One-step generation of mice carrying mutations in multiple genes by CRISPR/Cas-mediated genome engineering. Cell, 153(4), 910-918. doi:10.1016/j.cell.2013.04.025Yoshimi, K., Kunihiro, Y., Kaneko, T., Nagahora, H., Voigt, B., & Mashimo, T. (2016). ssODN-mediated knock-in with CRISPR-Cas for large genomic regions in zygotes. Nat Commun, 7, 10431. doi:10.1038/ncomms10431